Fluorescentna mikroskopija revolucionirala je našu sposobnost vizualizacije i proučavanja bioloških uzoraka, omogućujući nam da zaronimo u zamršeni svijet stanica i molekula. Ključna komponenta fluorescentne mikroskopije je izvor svjetlosti koji se koristi za pobuđivanje fluorescentnih molekula unutar uzorka. Tijekom godina korišteni su različiti izvori svjetlosti, svaki sa svojim jedinstvenim karakteristikama i prednostima.
1. Živina svjetiljka
Visokotlačna živina žarulja, snage od 50 do 200 vata, izrađena je od kvarcnog stakla i sfernog je oblika. U sebi sadrži određenu količinu žive. Kada radi, dolazi do pražnjenja između dvije elektrode, uzrokujući isparavanje žive, a unutarnji tlak u kugli naglo raste. Ovaj proces obično traje oko 5 do 15 minuta.
Emisija visokotlačne živine žarulje nastaje kao rezultat razgradnje i redukcije molekula žive tijekom pražnjenja elektrode, što dovodi do emisije svjetlosnih fotona.
Emitira jako ultraljubičasto i plavo-ljubičasto svjetlo, što ga čini pogodnim za pobuđivanje različitih fluorescentnih materijala, zbog čega se široko koristi u fluorescentnoj mikroskopiji.
2. Xenon svjetiljke
Još jedan često korišten izvor bijelog svjetla u fluorescentnoj mikroskopiji je ksenonska lampa. Ksenonske žarulje, kao i živine žarulje, daju širok spektar valnih duljina od ultraljubičastog do bliskog infracrvenog. Međutim, oni se razlikuju po svojim spektrima uzbude.
Živine žarulje koncentriraju svoju emisiju u područjima bliskim ultraljubičastim, plavim i zelenim, što osigurava stvaranje svijetlih fluorescentnih signala, ali dolazi s jakom fototoksičnošću. Stoga su HBO lampe obično rezervirane za fiksne uzorke ili slike slabe fluorescencije. Nasuprot tome, izvori ksenonskih žarulja imaju glatkiji profil pobude, što omogućuje usporedbu intenziteta na različitim valnim duljinama. Ova karakteristika je korisna za primjene poput mjerenja koncentracije kalcijevih iona. Ksenonske žarulje također pokazuju snažnu ekscitaciju u bliskom infracrvenom području, osobito oko 800-1000 nm.
XBO lampe imaju sljedeće prednosti u odnosu na HBO lampe:
① Ujednačeniji spektralni intenzitet
② Jači spektralni intenzitet u infracrvenom i srednjem infracrvenom području
③ Veći izlaz energije, što olakšava postizanje otvora objektiva.
3. LED diode
Posljednjih godina pojavio se novi konkurent u području izvora svjetlosti fluorescentne mikroskopije: LED diode. LED diode nude prednost brzog uključivanja i isključivanja u milisekundama, smanjujući vrijeme izloženosti uzorka i produžujući životni vijek osjetljivih uzoraka. Nadalje, LED svjetlo pokazuje brzo i precizno raspadanje, značajno smanjujući fototoksičnost tijekom dugotrajnih pokusa sa živim stanicama.
U usporedbi s izvorima bijele svjetlosti, LED diode obično emitiraju unutar užeg spektra pobude. Međutim, dostupno je više LED traka, što omogućuje raznovrsne primjene višebojne fluorescencije, čineći LED diode sve popularnijim izborom u modernim postavkama fluorescentne mikroskopije.
4. Laserski izvor svjetlosti
Izvori laserskog svjetla su visoko monokromatski i usmjereni, što ih čini idealnim za mikroskopiju visoke rezolucije, uključujući tehnike super rezolucije kao što su STED (Stimulated Emission Depletion) i PALM (Photoactivated Localization Microscopy). Lasersko svjetlo obično se odabire tako da odgovara specifičnoj valnoj duljini pobuđivanja potrebnoj za ciljani fluorofor, pružajući visoku selektivnost i preciznost u pobuđivanju fluorescencije.
Izbor izvora svjetlosti fluorescentnog mikroskopa ovisi o specifičnim eksperimentalnim zahtjevima i karakteristikama uzorka. Slobodno nas kontaktirajte ako trebate pomoć
Vrijeme objave: 13. rujna 2023